Внимание!
Предложения и заявки заказчиков

Размещение рекламных материалов

коммерческая реализация изобретений - ООО 'Адвансед Девелопмент Проджект' смотреть>>>

Требуются разработки по средствам контроля и ограничения по количеству дисковых операций производимых одним пользователемдля хостинг провайдера. смотреть>>>

Требуются разработки по использованию низкопотенциальной энергии смотреть >>>

экспресс– метод оценки уровня включения дейтерия и углерода в молекулы аминокислот

РАЗРАБОТКА ЭКСПРЕСС- МЕТОДА ОЦЕНКИ УРОВНЯ ВКЛЮЧЕНИЯ ДЕЙТЕРИЯ D И УГЛЕРОДА С13 В МОЛЕКУЛЫ АМИНОКИСЛОТ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ОБЪЕКТОВ



Предложено использовать метод высокочувствительной масс-спектрометрии электронного удара летучих производных аминокислот для экспресс-оценки уровня включения стабильных изотопов дейтерия D  и углерода 13С в молекулы секретируемых аминокислот и аминокислотные остатки суммарных белков биомассы L-фенилаланинпродуцирующего штамма факультативных метилотрофных бактерий Brevibacterium methylicum, ассимилирующих метанол по рибулозо-5-монофосфатному пути фиксации углерода, и L-лейцинпродуцирующего штамма облигатных метилотрофных бактерий Methylobacillus flagellatum, реализующего 2-кето-3-дезоксиглюконатальдолазный вариант рибулозо-5-монофосфатного пути фиксации углерода при выращивании бактерий на средах, содержащих в качестве источников стабильных изотопов (D)метанол, (13С)метанол и тяжёлую воду. Также исследовано включение L-[2,3,4,5,6-D]фенилаланина, L-[3,5-D]тирозина и L-[2,4,5,6,7-D]триптофана в мембранный белок бактериородопсин, синтезируемый Halobacterium halobium ЕТ 1001. Для масс-спектрометрического анализа мультикомпонентные смеси аминокислот в составе лиофилизованных культуральных жидкостей и белковых гидролизатов подвергали щадящему гидролизу в 6 М DСl (3% фенол) и 2 М гидроокиси бария с последующей модификацией аминокислот и метиловые эфиры N-диметиламинонафталин-5-сульфонил-производных аминокислот, которые препаративно разделеляли методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии и затем анализировали методом масс-спектрометрии электронного удара EI на приборе “MB-80 A” (Hitachi, Япония) при энергии ионизирующих электронов 70 эВ. Полученные молекулы изотопно-меченных [D]- и [13C]аминокислот представляли собой смеси, различающиеся количеством включённых в молекулу атомов изотопов. Уровни включения D  и 13С в молекулы секретируемых аминокислот и аминокислотные остатки суммарных белков биомассы, исследованные с помощью данного метода меняются в зависимости от содержания меченых субстратов в ростовых средах и различаются для разных аминокислот до 10% для L-лейцина/изолейцина и до 97.5% для L-аланина. Таким, образом, предложенный метод может использоваться для масс-спектрометрического экспресс-анализа уровней включения атомов стабильных изотопов в молекулы синтезируемых аминокислот.  

Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова, 117571, г. Москва, просп. Вернадского, д.86.

Список литературы.
1. Мосин О. В., Карнаухова Е. Н., Пшеничникова А. Б., Складнев Д. А., Акимова О. Л. // Биотехнология. 1993. N. 9. С. 16-20.
2. Егорова Т. А., Мосин О. В., Ерёмин С. В., Карнаухова Е. Н., Звонкова Е. Н., Швец В. И. // Биотехнология. 1993. N. 8. С. 45-50.
3. Мосин О. В., Складнев Д. А., Егорова Т. А., Юркевич А. М., Швец В. И. // Биотехнология. 1996. N 3. С. 3-12.

Добавить комментарий


Защитный код
Обновить

Комментарии