Внимание!
Предложения и заявки заказчиков

Размещение рекламных материалов

коммерческая реализация изобретений - ООО 'Адвансед Девелопмент Проджект' смотреть>>>

Требуются разработки по средствам контроля и ограничения по количеству дисковых операций производимых одним пользователемдля хостинг провайдера. смотреть>>>

Требуются разработки по использованию низкопотенциальной энергии смотреть >>>

Метод получения дейтерированного пуринового рибонуклеозида инозина высокого уровня дейтерированности

МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ ДЕЙТЕРИРОВАННОГО ПУРИНОВОГО РИБОНУКЛЕОЗИДА ИНОЗИНА ВЫСОКОГО УРОВНЯ ДЕЙТЕРИРОВАННОСТИ


Предложен метод получения  дейтерированного пуринового рибонуклеозида инозина (выход 3.9 г c 1 л ростовой среды)  высокого уровня дейтерированности (61 % атомов водорода в молекуле замещены на дейтерий). Метод заключается в выращивании адаптированного к дейтерию штамма Bacillus subtilis – продуцента инозина в тяжеловодородной среде  с 2%-ным гидролизатом биомассы метилотрофной бактерии Brevibacterium methylicum как источника дейтерий-меченых ростовых субстратов (условия получения гидролизата: автоклавирование дейтеро-биомассы в 0.1 н. DСl 30-40 мин при 08 ати). Условия получения дейтерированного инозина: синтетическая тяжеловодородная среда с 99,9%-ной тяжёлой водой (мас.%): глюкоза  12; D-меченый гидролизат B. methylicum  2; нитрат аммония  2; сульфат магния  1; карбонат кальция - 2. Выращивание бактерий проводили в колбах Эрленмейера вместимостью 500 мл (наполнение средой 100 мл) в течение 5-6 сут при 30-320С в условиях интенсивной аэрации. Выделение дейтерированного инозина заключалось в низкотемпературном осаждении высокомолекулярных примесей органическими растворителями ацетоном и метанолом, твердофазной адсорбции/десорбции на поверхности активированного угля, экстрактивного извлечения продукта, перекристаллизации и ионообменной хроматографии. Белки и полисахариды удаляли низкотемператрным осаждением ацетоном при -40С, проводя последующую адсорбцию суммарных рибонуклеозидов активированным углем на холоду. Десорбированные рибонуклеозиды извлекали из прореагировавшей твердой фазы элюцией этанольно-аммиачным раствором при 600С, а сам инозин экстракцией 0.3 М аммиачно-формиатным буфером (рН 8.9) с последующей перекристаллизацией в 80% этаноле. Окончательная стадия очистки заключалась в колоночной ионообменной хроматографии на катионообменнике AG50WX 4, уравновешенным 0.3 М аммиачно-формиатным буфером с 0.045 М хлоридом аммония в условиях изократической элюции с ТСХ контролем при R=0.5 (выход 3.9 г c 1 л ростовой среды). Изотопный состав полученного инозина, исследованный с помощью масс-спектрометрии FAB на импульсном масс-спектрометре VG-70 SEQ (Fisons, VG Analitical, США), снабженным цезиевым источником Cs+ на глицериновой матрице с ускоряющем напряжением 5 кВ и ионным током 0.6-0.8 мА, показал пики включения 4 ат.  дейтерия (20%), 5 ат. дейтерия (38%), 6 атомов дейтерия (28%), и 7 атомов дейтерия (14%) с включением дейтерия в рибозный и гипоксантиновый фрагменты молекулы инозина.


Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова, 117571, Москва, просп. Вернадского, д. 86.


Список литературы

1. Shvets V.I., Yurkevich A.M., Mosin O.V., Skladnev D.A. // Karadeniz Journal of Medical Sciences, 1995. V. 8. N 4. P. 231.
2. Мосин О. В., Складнев Д. А., Егорова Т. А., Швец В. И. //Биотехнология. 1996. № 10. С. 24-40.
3. Мосин О.В., Складнев Д.А., Швец В.И. // Изв. РАН. Сер. биол. N 3. С. 1-10

Добавить комментарий


Защитный код
Обновить

Комментарии